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      組織培養的條件和培養基制備注意事項

      文章作者:組織培養 發布時間:2021-01-26 16:07:09 瀏覽次數:0

        植物組織培養的條件

        1、植物組織培養的整個操作和培養過程都要求在嚴格無菌條件下進行,無菌是組織培養成功的首要條件。操作過程在接種室內超凈工作臺上進行;外植體材料要進行表面消毒;配制的培養基要進行高壓滅菌消毒。

        2、溫度處理操作和培養過程都是在恒溫條件下進行,一般在23—27℃之間,熱帶植物可偏高些,脫毒植物需要高溫處理。

        3、光照處理植物的器官必須有光,某些植物器官的生成是在無光條件下,但它的生長和發育必須有光。莖尖的生長及試管苗的繼代增殖以3000-5000lux光照強度適宜;生根試管苗以3000lux適宜。光質對愈傷組織誘導、增殖、器官的分化有不同的影響。光周期誘導一般是16h,黑暗是12h,對光周期敏感植物要掌握光照時間,否則影響植物的分化。

        4、培養基的酸堿度因植物的種類不同而有區別,大多數植物要求在5.8之間,喜酸性培養的植物要求的酸堿度較嚴格。

      組織培養的條件和培養基制備注意事項

        培養基的成分

        1、用于植物組織培養的培養基迄今不下幾十種。歸納起來,任何一種培養基均有以下幾部分組成:無機鹽(大量元素、微量元素),有機化合物(蔗糖、維生素類、氨基酸、核酸及其他水解化合物),鐵鹽螯合劑,植物激素。

        植物激素的純度對于組織培養的成功至關重要。接種的外植體,其分化速度(長芽)和分化方向(長根),均取決于所加激素的種類、數量及比例。簡言之,主要是生長素和細胞分裂素的加入量以及兩者的比例。一般生長素類包括吲哚乙酸、吲哚丁酸、萘乙酸;細胞分裂素類包括激動素、芐基氨基嘌呤、二甲基丙烯氨基嘌呤。

        培養基中的糖類主要是蔗糖,少數情況下使用葡萄糖。大量生產可使用蔗糖。糖在培養基中的作用是提供碳源,同時用于維持滲透平衡,瓊脂是固體培養基中的成分,作為固化劑支持。培養物在培養基的成本消耗中,瓊脂占有相當大的比例,培養基中瓊脂的加入量一般為4-7g。

        2、在組織培養生產中,培養基的制備對母液的需求量相當大,需一批一批地連續配制。為簡化配制過程,提高工作效率,一般將各種所需藥品先配制成高濃度溶液,貯備起來。到配制培養基時,按要求的濃度取一定量稀釋即可;我們稱這些高濃度的溶液為貯備液,習慣上稱母液。

        制備母液時,先將所有藥品分成幾組,每組藥品制成一種母液。分組的原則是同組藥品混合溶解時不會發生質的變化,也不產生沉淀。一般將藥品分成5組:大量元素、微量元素、鐵鹽、有機化合物類和植物激素。其中植物激素母液有若干種,每種激素都先制成1mg/ml的溶液。

      組織培養的條件和培養基制備注意事項

        母液制備注意事項

        1、藥品稱量要盡可能準確。大量元素用百分之一(千分之一)天平稱取,而微量元素、有機物類、植物激素等,則必須使用萬分之一的天平。

        2、母液配制完畢注入試劑瓶后,一定要標明母液的名稱、序號、濃度和配制日期等。

        3、配制好的母液應放置在冷藏箱內保存,尤其是有機物和激素類。

      組織培養的條件和培養基制備注意事項

        培養基的配制

        1、將用于配制培養基的容器洗凈,加入培養基總量四分之三的蒸餾水,放入所需的瓊脂和糖,然后加熱溶解。在加熱過程中應不斷地攪拌,以避免瓊脂粘鍋或溢出。

        2、待瓊脂和糖完全溶解后,按順序加入各貯備液以及所需的植物激素。

        3、用蒸餾水定容補充由于加熱蒸發所損失的體積。

        4、用蒸餾水調整pH。

        5、通過漏斗或下口杯將培養基注入組組織培養容器內,注入量為瓶容積的十分之一左右。灌裝要迅速,盡可能避免培養基粘在瓶壁上,且應在培養基未冷卻之前灌裝完畢。

      組織培養的條件和培養基制備注意事項

        6、用封口膜或含透氣膜的塑料蓋將瓶口或試管口封嚴。

        7、將封裝好的組織培養容器碼放在高壓滅菌鍋內。于105Pa壓力、121℃下滅菌20分鐘。如使用小型手提式滅菌鍋時,一定要注意,當鍋內壓力上升時,先反復放氣數次,將鍋內空氣排盡以后,再計算時間,否則達不到高壓滅菌的效果。

        8、對于一些受熱易于分解的物質,如維生素類,可采取先過濾滅菌的方法。待培養基滅菌后,尚未冷卻之前(40℃左右)加入并搖勻。經過高壓滅菌的培養基可在室溫下存放3-5天,或在冷藏箱內存放10天左右,最好在短時間內用完。

      組織培養的條件和培養基制備注意事項

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