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      多花黃精根莖芽高效組培的試驗材料與方法

      文章作者:組培室設計 發布時間:2019-10-08 09:05:18 瀏覽次數:0

        為了建立多花黃精高效組培增殖和生根體系,給其工廠化、規?;缣峁┛尚械年P鍵技術方案,以其根莖芽培養的無菌苗為研究對象,就外植體的不同采集時間和切分處理方式、增殖培養周期、繼代培養次數和培養基中活性炭的濃度對其根莖芽增殖和生根的影響情況進行了離體組織培養試驗。結果表明:3~4月采集的外植體其生長勢和腋芽萌發的表現均好,平均萌發腋芽6.6個;外植體的佳切分方式為處理Ⅰ,即將根莖芽切成1份的無菌塊莖;佳增殖培養周期為45d,平均萌發芽數為6.5個;適繼代培養次數為7次,繼代培養7次后平均每個根莖能誘導6.2個不定芽,能誘導的平均根數達20.8條;增殖培養基中活性炭的佳濃度為0.05g·L-1,生根培養基中活性炭的佳濃度為0.20g·L-1

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        材料與方法

        1、試驗材料

        2012年6月至2013年5月,在中國林業科學研究院亞熱帶林業實驗中心年珠林場林下經濟植物栽培實驗基地挖取多花黃精,切取根莖芽,參考周新華等人對外植體的滅菌處理方法,將消毒后的根莖芽接種在MS培養基上進行初代培養。培養約45d后,選擇初代培養的生長健壯的無菌苗作為試驗材料。

        2、試驗方法

        2.1、外植體的采集時間對無菌苗增殖的影響試驗

        選取分別于11~12、1~2、3~4、5~6、7~8和9~10月等6個時段采集的外植體初代培養后生長健壯的的無菌苗作為試驗材料,就外植體采集的不同時間對其腋芽增殖培養的影響情況進行了試驗,每個處理重復3次。將不同時間采集的外植體初代培養后生長健壯的無菌苗接種在不定芽誘導培養基MS+NAA1.5mg·L-1+KT1.5mg·L-1中,培養45d后觀察并統計其萌芽情況和萌發芽數,并按如下公式計算平均萌發芽數:

        平均萌發芽數=萌發的總芽數/接種的瓶數。

        2.2、增殖時間及切分方式對無菌苗增殖的影響試驗

        以初代培養后生長健壯的無菌苗為試驗材料,將根莖芽分別切成1、2、3份的無菌塊莖,分別以切分處理Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ來表示,并將其分別接種在MS+NAA1.5mg·L-1+KT1.5mg·L-1的培養基中,共計3個處理,每個處理接種20瓶,重復3次,分別于接種后的第25、35、45、55、65天觀察無菌苗的增殖情況,統計其萌發芽數,亦按如下公式計算平均萌發芽數:

        平均萌發芽數=萌發的總芽數/接種的瓶數。

        2.3、繼代培養次數對無菌苗增殖和生根的影響試驗

        從初代培養后生長健壯的無菌苗上切取1個腋芽作為第1次繼代培養的試驗材料,其后每次繼代培養的試驗材料均為其上一次繼代培養的增殖腋芽,每次繼代培養均將供試腋芽接種在MS+NAA1.5mg·L-1+KT1.5mg·L-1培養基上進行培養,共進行了7次繼代培養,每隔45d完成1次繼代培養,每個處理接種20瓶,重復3次,每次繼代培養結束末期觀察并統計其萌芽情況和萌發芽數,均按如下公式計算平均萌發芽數:

        平均萌發芽數=萌發的總芽數/接種的瓶數。

        以每一次繼代培養后的無菌苗作為試驗材料進行生根試驗,每個處理重復3次。將每一次繼代培養結束后的無菌苗均接種在1/2MS+NAA1.0mg·L-1的生根培養基中,培養45d后觀察其生根情況,并統計每個處理相應的生根數和生根率。

        生根率=生根瓶數/接種總瓶數;

        平均生根數=生根總條數/生根瓶數。

        2.4、添加劑對其無菌苗增殖和生根的影響試驗

        在增殖和生根培養基中分別添加濃度為0.05、0.10、0.20、0.40和0.50g·L-1的活性炭,共計5個處理,每個處理接種20瓶,重復3次,培養45d后觀察其組培苗增殖和生根情況,并統并計算平均萌發芽數、生根數和生根率。

        平均萌發芽數=萌發的總芽數/接種的瓶數;

        生根率=生根瓶數/接種總瓶數;

        平均生根數=生根總條數/生根瓶數。

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        3、培養條件

        在以上各試驗的培養基中均添加瓊脂6.1g·L-1,蔗糖30g·L-1,將培養基的pH值均調節為5.8,并將培養基置于121℃下高壓滅菌17min;以上試驗均在培養溫度為(24±2)℃、光照強度控制在1500~2000lx的范圍內、每天光照時間12h、濕度控制在70%左右的環境中進行。

        4、數據處理

        采用SPSS18.0統計分析軟件進行方差分析和多重比較。多重比較采用顯著系數為0.05的Duncan多范圍檢驗方法,所有檢驗數據都在同一量綱上進行分析。

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